脊髓损伤
CSTR0I012B0782
疾病概述
一般根据打击力度将小鼠脊髓打击损伤模型分为轻度、中度以及重度损伤三类。鉴 于打击器设置上各有差异，以IH-400 打击器为例，打击力度分别为50kdyn(1dyn=10⁻⁵N) (轻度)、70 kdyn(中度)、90 kdyn(重度)。此外还可改变的打击参数包括组织形变程度以 及停留时间。各参数可根据研究目的进行设置，目前打击模型主要通过改变打击力度实现 不同程度的损伤。在本章中以打击力度70 kdyn 为例介绍中度脊髓损伤模型的建立。
模型制作方法
(1)小鼠常规吸入麻醉。
(2)背部剃毛。
(3)取俯卧位安置于手术台上，术区常规消毒。
(4)沿背中线将皮肤切开2～3cm (图4.2)。
(5)用齿镊固定脊柱。在紧贴脊柱左、右的背部肌肉各划一切口，方便齿镊夹持固定 脊 柱 。
(6)将小鼠自然放平，背部弯曲最高点为T₁₀ 段。用齿镊夹持固定T₁ 段，用手术刀 切断T₁₀ 段与前、后节段之间的软组织连接，T₁₀ 段尾端暴露明显缝隙(图4.3)。
(7)用齿镊稍稍提起小鼠脊柱，使T₁₀ 椎板呈水平，将显微剪一边呈同样水平角度小 心从T₁0 段尾端缝隙伸入T₁₀ 椎板下方，剪开一侧椎板。
(8)同法剪开另一侧并移除T₁₀ 椎板，暴露下方脊髓(图4.4)。
(9)在小鼠身下垫一块纱布，用打击器自带的夹持器夹持T¹0段前、后段脊柱(图4.5)。
(10)顺时针转动旋转杆，降下打击头，接触到小鼠脊髓表面后记下刻度。
(11)逆时针回旋2圈抬起打击头，在打击器控制软件窗口界面输入力度、停留时间 等打击参数(图4.6)。
(12)点击 “Start Experiment” 并确认，打击后软件自动记录实际的打击力度和位移 等参数(图4.7)。
(13)打击后小鼠一般有蹬腿或摆尾反应，脊髓组织可见红肿或出血。
(14)迅速松开夹持器，取下小鼠，用少量生理盐水清理脊髓表面。
(15)如有出血适当止血，之后在损伤的脊髓上覆盖少许明胶海绵(图4.8)。
(16)常规缝合皮肤切口。
(17)皮下注射生理盐水0.5mL。
(18)将小鼠放至保温箱中苏醒。苏醒后移至饲养笼内。
(19)术后3天内每天皮下注射0.5mL 生理盐水。
(20)1周内分别于早晚按压膀胱帮助排尿1次，监测体重变化。
模型表型数据
(一)术中评估
1.脊髓组织形态变化
脊髓组织打击前后对比，损伤后组织局部明显红肿(图4.9)。
2.血流评估
脊髓组织打击前后血流状况对比，发现损伤部位血流显著降低(图4.10)。
(二)术后评估
1.组织病理学
脊髓损伤8周后取损伤组织进行病理染色，如进行Luxol Fast Blue(LFB) 髓鞘染色 (图4.11),可见损伤病灶区域出现组织结构破坏、组织萎缩以及髓鞘损伤等变化。由于是 脊髓背侧打击的中度损伤模型，打击处即损伤核心区组织破坏最严重，仅腹侧保留小部分 完整组织。
2.行为学评估及体重变化
Basso Mouse Scale(BMS) 评分是根据骨髓损伤小鼠运动功能改变特点设计的一种敏 感、可靠、有效的小鼠运动评分方法。在该方法中分值越高表示恢复越好，正常动物表现 为9分。脊髓损伤后通过BMS 评分评估小鼠后肢运动功能的恢复情况(图4.12)。
考察脊髓损伤小鼠体重随时间变化情况，可见脊髓损伤后小鼠体重会短暂下降，在之 后的数天内会逐渐稳定并缓慢回升(图4.13)。
动物模型的评价与验证
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